Pwodwi yo

Nouvo segondè-pèfòmans likid kwomatografi tès pou glycosyltransferases ki baze sou derivatization ak asid antranilik ak deteksyon fluoresans.

Esay yo te devlope lè l sèvi avèk chimi etikèt inik nan asid 2-aminobenzoik (2AA; asid antranilik, AA) pou mezire aktivite nan tou de β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) ak α2-6 sialyltransferase (ST-6) pa likid segondè-pèfòmans. Kwomatografi (HPLC) ak deteksyon fliyoresan (Anumula KR. 2006. Avans nan metòd derivatization fluoresans pou segondè-pèfòmans likid chromatografik analiz de glycoprotein idrat kabòn. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) ak N-acetyllactosamine yo te itilize kòm akseptè ak uridine difosfat (UDP) -galaktoz ak cytidine monofosfat (CMP) -N-acetylneuraminic asid (NANA) kòm donatè pou GalT-1 ak ST-6, respektivman.Pwodwi anzimatik yo te make in situ ak AA epi yo te separe de substrats yo sou kolòn TSKgel Amide 80 lè l sèvi avèk kondisyon nòmal-faz.Inite anzim yo te detèmine nan zòn pik yo pa konparezon ak estanda derivatize Gal-β1-4GlcNAc ak NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearite (tan ak konsantrasyon anzim), presizyon (intra- ak interassay) ak repwodiksyon pou tès yo te etabli.Esay yo te jwenn itil nan kontwole aktivite anzim yo pandan izòlman ak pirifikasyon.Esay yo te trè sansib epi yo te fè egal oswa pi bon pase mezi tradisyonèl ki baze sou sik radyoaktif.Fòma tès la ka itilize tou pou mezire aktivite lòt transferaz yo, depi aseptè idrat kabòn yo genyen yon fen rediksyon pou etikèt.Yo te devlope yon tès pou aseptè glikoprotein lè l sèvi avèk IgG.Yo te devlope yon metòd kout HPLC profilage pou separasyon IgG glycans (biantennary G0, G1, G2, mono- ak disialylated), ki te fasilite detèminasyon an nan aktivite GalT-1 ak ST-6 nan yon fason rapid.Anplis de sa, metòd profilage sa a ta dwe itil pou kontwole chanjman ki fèt nan glikan IgG nan anviwònman klinik yo.