Pwodwi yo

Pou detèmine espesifikman plizyè metabolit 5-fluorouracil (5-FU) ak de nukleotid monofosfat andojèn, nou devlope yon metòd orijinal ki baze sou yon likid chromatografi-tandem mas spèktrometri (LC-MS/MS).Egzamen sa a pèmèt detèminasyon: (i) pwodiksyon intraselilè 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monofosfat (5-FdUMP) soti nan 5-FU oswa 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) enpak konsantrasyon 5-FdUMP sou rapò entraselilè 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP), ak (iii) limit sekresyon 5-FdUMP ak 5-FU soti nan selil imen kiltive pa transpòtè ABC.Anba kondisyon eksperimantal nou yo, selil yo te enkube ak 5-FU oswa 5-FUrd.Lè sa a, pwoteyin selilè yo te presipite pa metanol.Pwosedi sa a bay gwo rekiperasyon ekstraksyon.Anplis de sa, pou mezire 5-FU ak 5-FdUMP sekresyon nan selil yo, nou te pote soti nan quantification nan molekil sa yo nan mwayen kilti.Medya yo te swa dirèkteman sou fòm piki (5-FU) oswa anba te ale yon ekstraksyon faz solid lè l sèvi avèk katouch ekstraksyon Oasis Wax (5-FdUMP).Separasyon analit yo te fèt sou yon kolòn dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) ak mòd izokratik lè l sèvi avèk tanpon fòma amonyòm / metanol / dlo (5/5/90, v / v) kòm faz mobil.Tan an kouri pa te depase 6.2 min.Analit yo te ionize nan yon koòdone electrospray anba mòd ion negatif.Nou valide metòd la sou yon seri 2.5-150 ng mL -1 dapre konpoze yo.Varyab ant ak entè-esay te pi ba pase 10% sou sèt jou.Tout konpoze yo te estab nan selil oswa nan mwayen kilti lè echantiyon yo te estoke nan -20 ° C pou omwen de semèn, epi apre twa sik friz-dekonjle.Pa gen okenn efè matris obsève nan tou de medya yo.