Pwodwi yo

Fason ki efè mitasyon similtane yo konbine pou chanje aktivite anzimatik se pa fasil previzib paske efè sa yo pa toujou aditif nan yon fason lineyè.Pakonsekan, karakterizasyon efè mitasyon similtane rezidi asid amine ki mare substra a ka fè yon kontribisyon enpòtan nan konpreyansyon espesifik substra anzim yo.Nan beta-glycosidase ki soti nan Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), tou de résidus Q39 ak E451 kominike avèk substra a e sa esansyèl pou defini espesifik substra.Doub mutan Sfbetagly (A451E39, S451E39 ak S451N39) te prepare pa mutagenèz ki dirije sou sit, ki eksprime nan bakteri ak pirifye lè l sèvi avèk chromatografi afinite.Anzim sa yo te karakterize lè l sèvi avèk p-nitrophenyl beta-galactoside ak p-nitrophenyl beta-fucoside kòm substrats.Rapò k chat/Km pou mutan sèl ak doub nan Sfbetagly ki gen mitasyon ki dirije sou sit nan pozisyon Q39 ak E451 yo te itilize pou demontre efè sou enèji gratis ESdouble ponya (konplèks eta anzim-tranzisyon) nan doub mitasyon yo (Gdouble). daggerxy) se pa sòm efè ki soti nan sèl mitasyon yo (Gdouble daggerx ak Gdouble ponya).Diferans sa a nan Gdouble ponya endike ke efè mitasyon sèl yo pasyèlman sipèpoze.Pakonsekan, efè komen sa a konte sèlman yon fwa nan Gdouble daggerxy.Done kristalografik sou beta-glycosidases revele prezans yon kosyon idwojèn bidentate ki enplike résidus Q39 ak E451 ak menm gwoup idroksil substra a.Se poutèt sa, tou de done tèrmodinamik ak kristalografik sijere ke résidus Q39 ak E451 fè egzèsis yon enfliyans mityèl sou entèraksyon respektif yo ak substra a.